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如何挑取單克隆,你做對了嗎?

小編經?;嶠擁嬌蒲泄ぷ髡吖賾贏ddgene質粒如何培養的電話咨詢。尤其,很多人是第一次收到從美國漂洋過海后,終于等來的質粒。關于Addgene推薦什么方法來復蘇收到的穿刺菌的問題,快來看看Addgene的權威說明。

 

常見問題&FAQ

  • 如何復蘇穿刺菌?
  • 為什么一定要挑取單克隆菌落?
  • 如何劃線培養?

下面這個視頻中就這些問題做了詳細的說明。趕快點擊視頻學習吧!別忘記了把好東西分享哦!

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為什么一定要挑取單克???

當從甘油保存的細菌或者穿刺菌中復蘇細菌時,從瓊脂板上挑取單菌落再液體培養顯得尤為重要。

為什么呢?由于甘油菌或穿刺菌中的大多數細菌細胞在遺傳上應該是相同的,但是偶然情況下,會存在個別隱藏的突變細菌。如果你只是簡單的從混合菌落中挑選了一團細菌,然后在液體培養基中培養,那么突變的細菌就有可能會接管整個培養物,從而影響您的實驗。我們可以通過劃線挑選單個菌落的方式來解決問題。在這種情況下,每個單獨的菌落就是單克隆,即它們在遺傳學上是相同的。使用這些單克隆菌落形成的液體培養物,將會獲得預期的質粒產率并在后期試驗中獲得更一致的結果。

 

劃線前需要準備的材料

  • 在正式開始培養前,我們需要收集一些必要的材料。
  • 首先是含有你感興趣質粒的甘油菌或穿刺菌;
  • 其次是含有合適抗生素的LB瓊脂平板;
  • 無菌的牙簽或者無菌的接種環;
  • 酒精燈或其他火焰;
  • 30或37攝氏度的干燥培養箱;
  • 最后是良好的無菌操作技術。

 

劃線培養方法

首先,我們取出含有適當抗生素的LB瓊脂平板,確保平板上沒有污染并且干燥。如果平板上有水珠,你可以把它打開然后放在火焰下約10分鐘來風干。接下來,我們要看一下我們的穿刺菌,確保其中有可見的細菌生長。然后取一個無菌的牙簽,把它插入并接觸到有細菌生長的穿刺區域,這個過程也可以是將無菌的牙簽浸入到半融化的甘油菌當中。請注意的是,在牙簽上你不需要看到肉眼可見的一團細菌,看起來很干凈的牙簽表面可能已經被細菌充分覆蓋了。

用牙簽輕輕地從平板的邊緣附近開始劃線,牙簽與平板接觸角度大概在45度左右。請注意一定要輕輕的劃線,不要用牙簽刺破平板,否則你就會在劃線過程中將瓊脂翹起來。在劃線時要遵循一定的路徑,并且需在每個新路徑開始時用一根新的無菌牙簽。用第一根牙簽劃線時,我們需要輕輕地連續劃線大約至1/3平板大小,并注意避免碰到平板的邊緣。扔掉第一根牙簽,并轉動平板,然后使用一根新無菌牙簽從上一次結束的地方開始連續劃線約 1/3區域,并在靠近邊緣的地方結束。最后,我們用第三根牙簽再重復一次這一過程。盡管,這個過程會很快,我們仍需要很細心。

需要確保在培養之前平板是完全干燥的。這是由于,如果細菌在平板上是一層液體的話,它們有可能會在平板上擴散并形成一層菌群而不是單個的菌落。需要注意的是,要將平板倒置放入培養箱中,以避免冷凝的液體會滴到菌落上而干擾它們的生長。現在我們已經完成了劃線,我們將平板倒置放入培養箱中過夜或者至少培養12小時。你可以看到我們精心劃線后會有單個菌落出現,之后就可以挑取單個菌落以便用于下游各種各樣的實驗。

 

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